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Producción y transplante de embriones congelados de bovinos criollos Limonero

Abstract

Production and transfer of frozen bovine embryos from criollo limonero cattle

The venezuelan criollo limonero cattle came originally from the hispanic breeds brought to America during the colonial times. This breed is charcaterized for ist great adaptation to the extreme warm tropical conditions, high fertility and milk production. The largest population of this breed is located in the north-western region of Maracaibo Lake on the Limon and Guasare river banks in the Mara county of Zulia state. An official program (CORFONLUZ)* of multiovulation and embryo trsnfer (MOET) is being conducted with the objetives of increasing their genetic value. Up to now a total of 253 (60.5%) transferable embryos have been produced from which 222 (87.7%) were frozen to build a genetic bank. From 70 thawed and evaluated embryos 60 (85.7%) were considered good to be transfered to crossbred (Cebu x dairy breeds) recipents. From the first 37 embryos trsnfered, 18 (48.6%) resulted in pregnancy and the rest are wainting for pregnancy diagnosis. This prelimanry pregnancy rate (48.6%) is considered satisfactory and clarey shows the advantage of these embryo cryopreservation technologies to warrant the genetic future of this breed considered a venezuelan patrimony.

Key words: Frozen embryos, bovines, Criollo Limonero.

Palabras claves: Embriones congelados, bovinos, Criollo Limonero. 

INTRODUCCION 

El Criollo Limonero es una raza venezolana originaria de bovinos hispanos traídos a la América durante la colonia la cual se caracteriza por su gran resistencia a las condiciones climáticas del bosque seco tropical, destacándose además por su fertilidad y temperamento lechero. La mayor concentración de estos bovinos se encuentra ubicada en el nor-oeste del Lago de Maracaibo y más específicamente en las márgenes de los ríos Limón y Guasare del Distrito Mara del Estado Zulia. 

Un programa oficial de multiovulación y transplante de embriones (MOET) se está realizando con el propósito de incrementar y mejorar el Criollo Limonero que por su reducida población existe la tendencia a su desaparición.

El presente estudio tiene como objetivo principal dar a conocer los resultados de producción y fertilidad postransplante de embriones congelados de esta raza de ganado. 

MATERIALES Y METODOS. 

Un total de 32 vacas multíparas Criollo Limonero élite conformaron inicialmente el plantel de donadoras siendo superovuladas mediante un régimen de 2.5, 2.0, 1.0, 1.0 ml x 2 de Folltropin (Vetrepharm Canadá), durante 4 días. El tercer día del tratamiento fueron aplicados 22.5 mg de Luprostiol (Prosolvin, Intervet, Holanda) para inducir el celo. Los animales fueron servidos a las 0,12 y 24 horas después de detectado el celo, empleando semen de toros Criollo Limonero. Una semana después de la inseminación las donadoras  fueron recolectadas utilizando 1.000 ml de solución Phosfato-buffer-salino modificado (PBSM), suplementado con 0.04% de suero albúmina bovina (BSA), fracción V, antibióticos y atimicóticos (anti-anti). Los huevos recolectados fueron clasificados en embriones transferibles (ET), embriones no transferibles (ENT) y óvulos no fecundados (ONF) (Linder y Wright, 1983). 

Para la congelación de los embriones se empleó una solución de 1.5 M  de Etilenglicol 0.4% y 0.1 M Suerosa (Voelkel y Xu, 1995). Los embriones fueron expuestos en Etilenglicol durante 10 minutos y ebvasados en pajuelas de 0.25 ml. Los embriones fueron colocados en la cámara de congelación 6^oC durante 10 minutos. La estabilización fue inducida a los 2 minutos seguido de una segunda fase de enfriamiento hasta 32^oC. Las pajuelas fueron secadas y su contenido fue vertido en una placa de Petri (35x10 mm) conteniendo 2.0 ml de medio de mantenimiento (PBSM, 0.4% BSA, anti-anti) durante 5 minutos.  Los embriones después de su evaluación morfológica fueron envasados en pajuelas de 0.25 ml y transferidos no quirúrgicamente empleando la pistoleta miniturizada francesa (IMV, Cassou). Los embriones fueron depositados en el cuerno ipsilateral al cuerpo lúteo de receptoras mestizas (cebú x raza lechera) una semana después del celo previamente sincronizado con prostaglandina F2a. El diagnóstico de preñez fue realizado por palpación rectal 40-50 días postransplante. 

Resultados y Discusión. 

De 64 superovulaciones practicadas en 32 donadoras se obtuvo un total de 418 huevos de los cuales 253 (60.5%), 122 (29.1%) y 43 (10.2%) fueron clasificados como ET, ENT y ONF respectivamente. 

Cuadro No. 1.

Relación de Producción de Huevos/Embriones. 

De los 253 embriones transferibles 222 (87.7%) fueron congelados para conformar de esta manera el primer banco genético de embriones Criollo Limonero en el país. Hasta el presente un total de 70 embriones han sido descongelados de los cuales 60 (85.7%) fueron considerados normales, siendo transferidos en receptoras mestizas. De los primeros 37 embriones se obtuvieron 18 (48.6%) preñeces quedando en espera de diagnóstico 23 transplantes (Cuadro No. 2). 

Cuadro No. 2.

Congelación y Transplante de Embriones. 

El total de 253 (60.5%) embriones transferibles recolectados además de constituir una importante cantidad de embriones sirve para garantizar la perpetuidad del Criollo Limonero ya que 222 (87.7%) de estos embriones fueron congelados. La tasa obtenida de 60% de embriones transferibles coincide con la reportada por otros autores en otras razas Bos taurus y latitudes diferentes (González et al, 1990). Adicionalmente estos datos sirven para corroborar una vez más la alta eficiencia reproductiva que caracteriza esta raza de ganado ya que el índice de fertilidad de los huevos recolectados resultó de 89.6%. Una tasa preliminar de preñez de 48.6% obtenida con embriones congelados es satisfactoria encontrándose dentro de los parámetros reportados por otros autores en clima tropical (Megahed, 1995). Este índice de preñez sirve de marco de referencia sobre el potencial que ofrece esta tecnología reproductiva para acelerar el proceso de mejoramiento y difusión del Criollo Limonero.

CONCLUSIONES

Este trabajo sirvió para demostrar el potencial del transplante de embriones como herramienta efectiva de difusión y mejoramiento genético del Criollo Limonero. La recolección de 253 embriones transferibles representa una fuente importante de material genético de los cuales 222 (87.7%) fueron congelados para constituir el primer banco genético de germoplasma Criollo Limonero. Una tasa de 48.6% de preñez obtenida con embriones congelados es considerada como satisfactoria en nuestro medio ambiente tropical.

 LITERATURA CITADA 

González A, J.G. Lussier, T.D. Garruthers, B.B. Murphy and R.J. Mapletoft. 1990. Superovulation of beef heifers with Folltropin: A new FSH preparation containing reduced LH activity. Theriogenology 33-519-599. 

Lange H. 1995. Cryopreservation of bovine embryos and demi-embryos using glicol for direct transfer after thawing. Theriogenology, 258. 

Linder G. M. And R. W. Wright, Jr. 1983. Bovine embryo morphology evaluation. Theriogenology, 20, 407-416. 

Megahed G. A. 1995. The influence of season and embryos stage on pregnancy rate of frozen thawed cow embryos. Indian Vet. J. 72. 146-149. 

Voelkel S. A. And Y.X. Xu. 1992. Direct transfer of frozen thawed bovine embryos. Theriogenology, 37. 23-37. 

INFORME DEL PROGRAMA MOET

La primera parte de este informe se dedicará a hacer un análisis de los resultados, la cual comenzó con la fase de Superovulación y Recolección de Embriones en Enero del año 1996, cuando el programa era coordinado por la empresa Viateca y ejecutado por los técnicos de esa empresa, Sunny Zambrano por FONAIAP y Pedro Esté por CORPOZULIA. El programa se comenzó con 38 vacas Elites Criollo Limonero de la Estación Local Carrasquero del FONAIAP, las cuales fueron utilizadas como donadoras. Se montaron 13 programas de Superovulación, Recolección y Congelación de Embriones, siendo el último en la fecha 27/10/97, período durante el cual se lograron recolectar 330 embriones transferibles provenientes de 22 vacas que respondieron a la Superovulación y dando por lo menos un (1) embrión transferible, por lo que se obtuvo un promedio de 15.0 embriones transferibles por donadora, el porcentaje de vacas que respondieron por lo menos con un embrión transferible fue de 57.9%.

Del total de vacas donadoras (38), treinta y una (31) respondieron al tratamiento Superovulatorio lo que representa el 81.6% con producción de embriones (transferibles, defectuosos u óvulos no fecundados) y cuyos resultados se pueden apreciar en los cuadros 1, 2 y 3.

Cuadro No. 1.

Número de Embriones Producidos por Vacas Donadoras Criollo Limonero Superovuladas. 

 Cuadro No. 2.

Número de Embriones Recolectados por Superovulación Realizada en Vacas C.L.

“Cabe destacar que hubo vacas que se Superovularon pero no se lavaron” 

   Cuadro No. 3

Número de Embriones Recolectados por Lavado Realizado en Vacas Donadoras C.L.

La vaca donadora que más embriones transferibles produjo en un solo lavado fue la vaca No,. 736C con 24 embriones transferibles (E.T.) y la más productiva fue la 827 con 45 (E.T.) en un total de 3 lavados. En los Cuadros 4, 5, 6 y 7, se presentan los resultados de transplantes de embriones en vacas receptoras Criollo Limonero, vacas y novillas mestizas receptoras en las haciendas Jaguey Rojo y Tres de Oro.

 Cuadro No. 4.

Resultado de los Transplantes de Embriones en Vacas Criollo Limonero Receptoras en la Estación Local Carrasquero.

Cuadro No. 5

Resultado de los Transplantes de Embriones en Vacas y Novillas Mestizas Receptoras en la Hacienda Jaguey Rojo. 

Cuadro No. 6

Resultado de los Transplantes de Embriones en Vacas y Novillas Mestizas Receptoras en la Hacienda Tres de Oro 

 Cuadro No. 7

Porcentaje de Preñez (%) Promedio en las Tres Fincas 

1.      Hubo dos novillas receptoras en la Hacienda Jaguey Rojo que abortaron, por lo que nacieron solamente 19 becerros.

2.      En las novillas receptoras de la Hacienda Tres de Oro hubo un aborto y un parto gemelar por lo que siempre nacieron 9 becerros.

3.      En la Estación Local Carrasquero murió una becerra (No. 6111) producto de transplante. Por lo tanto el total de becerros fue de 37 (vivas). 

En los Cuadros 8, 9 y 10 se presenta el porcentaje de preñez por vacas y novillas receptoras en las Haciendas Jaguey Rojo y Tres de Oro, pero haciendo la aclaratoria de que en la Estación Local Carrasquero las 22 vientres receptoras eran vacas en su totalidad lo que quiere decir que no se transplantaron embriones en novillas Criollo Limonero. 

Cuadro No. 8.

Porcentaje de Preñez (%) en Vacas y Novillas Receptoras en la Hacienda Jaguey Rojo. 

 Cuadro No. 9

Porcentaje de Preñez (%) en Vacas y Novillas Receptoras en la Hacienda Tres de Oro 

Cuadro No. 10

Porcentaje de Preñez (%) Promedio en Vacas y Novillas Receptoras en las Tres Fincas (Carrasquero, Jaguey Rojo y Tres de Oro). 

En los Cuadros 11, 12 y 13 se detalla el porcentaje de preñez según la raza o mestizaje de las receptoras en cada una de las fincas. El porcentaje de preñez en vacas receptoras Criollo Limonero en la Estación Local Carrasquero aparece en el Cuadro No. 4 (22/9 = 40.90%) 

Cuadro No. 11

Porcentaje de Preñez (%) según el Mestizaje en Vientres Receptores de la Hacienda Jaguey Rojo 

 Cuadro No. 12

Porcentaje de Preñez (%) según el Mestizaje en Vientres Receptores de la Hacienda Tres de Oro 

 Cuadro No. 13

Porcentaje de Preñez (%) Promedio para las diferentes Receptoras (Puras y Mestizas) de las Tres Fincas (Carrasquero, Jaguey Rojo y Tres de Oro)

En los Cuadros 14, 15, 16 y 17 se muestra el porcentaje de preñez según el grado de desarrollo del cuerpo lúteo en los vientres receptores en cada una de las fincas.

Cuadro No. 14.

Porcentaje de Preñez (%) según el Grado de Desarrollo del Cuerpo Luteo en Vacas Criollo Limonero transplantadas en la Estación Local Carrasquero. 

 Cuadro No. 15.

Porcentaje de Preñez (%) según el Grado de Desarrollo del Cuerpo Luteo en Vientres Receptores  transplantados en la Hacienda Jaguey Rojo 

 Cuadro No. 16

Porcentaje de Preñez (%) según el Grado de Desarrollo del Cuerpo Luteo en Vientres Receptores  transplantados en la Hacienda Tres de Oro 

 Cuadro No. 17

Porcentaje de Preñez (%) promedio para los diferentes grados de desarrollo del Cuerpo Luteo en los Vientres Receptores de las tres Fincas 

En el Cuadro 18 se presenta la clasificación de los embriones transferidos según el estado de desarrollo embrionario en que fueron transplantados y el porcentaje de preñez de cada uno de estos.

Cuadro No. 18

Distribución de Embriones Transplantados y Porcentaje de Preñez por Estado de Desarrollo del Embrión (En las 3 Fincas) 

En resumen se transplantaron 99 embriones durante 89 transplantes realizados, habiendo receptoras que se les transplantó más de un (1) embrión.

Embriones descartados por descongelación = 6

Total de embriones sacados del termo = 105

Quedan en inventario (330 – 105) = 225

Hasta el 12/07/97 del último transplante correspondiente a esta primera etapa (Viateca)

Producto de estos transplantes nacieron 37 becerros, distribuidos de la siguiente manera: 

Finca Jaguey Rojo

      TOTAL = 19                                         Finca Tres de Oro

     TOTAL = 9       * Parto Gemelar         ** Natimorto

  Estación Local Carrasquero  

     TOTAL = 8  

Con respecto a los animales producto de transplante de embriones en la Estación Local Carrasquero tenemos lo siguiente:

Actualmente 5 machos y 3 hembras ya que una de estas murió a los pocos días de nacida, más 2 machos muertos con fecha 17/07/98 (6109) y 16/12/98 (6108), del resto tenemos que los machos tienen peso promedio de 320 kg y las hembras 250 kg, las cuales no han sido servidas por no haber alcanzado el peso. 

En cuanto a los animales que están en la Hacienda Jaguey Rojo (10 hembras y 9 machos) hay 9 novillas preñadas con una edad al servicio fecundo de 30 meses aproximadamente, la novilla que está vacía es porque no ha alcanzado el peso del servicio que es la 84284. Los machos se han convertido en toros los cuales desde hace meses están aptos para el servicio. 

En la Hacienda Tres de Oro hay 7 hembras y 2 machos, de estas murió 1 hembra por lo que quedan 8 animales, de las 6 hembras que quedaron hay 3 paridas:

7254 parió el 16/07/2000  No. de la cría 00141 macho (murió)

7252 parió el 04/06/2000 No. de la cría 00109 hembra (murió)

7249 parió el 07/06/2000 No. de la cría 00114 macho. 

Edad promedio al parto = 30 meses por lo que el servicio fecundo debió ser a los 21 meses. En relación a la segunda etapa del Programa MOET ha sido coordinado por mi persona y con la participación de los Méd. Vet. Marcelo Gil y Pedro Esté, realizamos 8 transplantes sin éxito pero desde hace dos meses hemos contado con la colaboración del Méd. Vet. Airtor Deondis con el cual se han transplantado 12 animales de las cuales ya hay 2 preñadas y 1 posible preñez que está a la espera de confirmar el diagnóstico a la palpación. 

El total de embriones utilizados en esta segunda etapa fue de 23, ya que se descartaron 3 por las siguientes razones:

·        Botó el tapón la pajuela al momento de descongelarla y se pasaron del tiempo requerido para ser transplantado por presentar las novillas cervix no permeable. 

El inventario de los embriones que quedan en el termo es el siguiente:

·        Existencia al 12/09/97                  = 225 embriones

·        Utilizados en la 2da. Etapa           =   23 embriones

·        Total embriones al 07/11/2000    = 202 embriones 

La programación a futuro es continuar con los transplantes en las Haciendas de CORPOZULIA (Jaguey Rojo y Tres de Oro) y según información extraoficial la Facultad de Ciencias Veterinarias de LUZ, está interesada en que se practiquen unos transplantes en novillas receptoras en la Finca San Pedro de su propiedad. Se piensa aprovechar al máximo los meses de Noviembre, Diciembre y Enero del próximo año para colocar la mayor cantidad de embriones aprovechando esta mejor época del año para la preñez de animales. 

Esperando haber sido lo suficientemente explícito y dispuesto a suministrar cualquier información adicional que involuntariamente haya omitido, me despido de ustedes.  

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